Il gene BCOR codifica una proteina ad attività co-repressoria che partecipa al Polycomb Repressive Complex 1 non-canonico (PRC1.1) con attività epigenetica di silenziamento genico. Il PRC1.1 trasferisce molecole di Ubiquitina in Lys119 dell’istone H2A e agisce in connessione con l’attività metil-transferasica di PRC2 (H3K27me). Alterazioni somatiche di BCOR sono state riscontrate in varie tipologie di tumori, mentre le duplicazioni in tandem (ITD) dell’ultimo esone caratterizzano i sarcomi a cellule chiare del rene (CCSK), il sottogruppo dei CNS HGNET-BCOR e una quota di sarcomi indifferenziati infantili. Al fine di definire la signature molecolare della ITD di BCOR è stato effettuato uno studio di whole transcriptome sequencing di 8 casi di CCSK comparati con 92 tumori di Wilms. L’analisi ha confermato l’upregolazione di BCOR e l’induzione dei geni target dell’attività metil-transferasica di PRC2, a supporto della loss-of-function di PRC2. Per riprodurre il modello di oncogenesi indotta da BCOR è stato disegnato un approccio di gene editing con Crispr/Cas9 in cellule HEK-293, mediante co-trasfezione di un plasmide Donor con regione di omologia centrata sulla ITD e di un plasmide comprendente la Cas9 e la sequenza sgRNA per BCOR. La caratterizzazione dei ricombinanti ha permesso l’isolamento di cloni con la ITD e di knockout funzionali che mostrano la down-regolazione trascrizionale e proteica di BCOR e l’upregolazione dei target di PRC2, a supporto della rilevanza del modello. Lo studio proseguirà con l’introduzione della ITD in iPSC per individuare i pathway alterati e il loro targeting farmacologico.
Studio del meccanismo molecolare delle alterazioni di BCOR mediante gene editing
A. Astolfi;
2018
Abstract
Il gene BCOR codifica una proteina ad attività co-repressoria che partecipa al Polycomb Repressive Complex 1 non-canonico (PRC1.1) con attività epigenetica di silenziamento genico. Il PRC1.1 trasferisce molecole di Ubiquitina in Lys119 dell’istone H2A e agisce in connessione con l’attività metil-transferasica di PRC2 (H3K27me). Alterazioni somatiche di BCOR sono state riscontrate in varie tipologie di tumori, mentre le duplicazioni in tandem (ITD) dell’ultimo esone caratterizzano i sarcomi a cellule chiare del rene (CCSK), il sottogruppo dei CNS HGNET-BCOR e una quota di sarcomi indifferenziati infantili. Al fine di definire la signature molecolare della ITD di BCOR è stato effettuato uno studio di whole transcriptome sequencing di 8 casi di CCSK comparati con 92 tumori di Wilms. L’analisi ha confermato l’upregolazione di BCOR e l’induzione dei geni target dell’attività metil-transferasica di PRC2, a supporto della loss-of-function di PRC2. Per riprodurre il modello di oncogenesi indotta da BCOR è stato disegnato un approccio di gene editing con Crispr/Cas9 in cellule HEK-293, mediante co-trasfezione di un plasmide Donor con regione di omologia centrata sulla ITD e di un plasmide comprendente la Cas9 e la sequenza sgRNA per BCOR. La caratterizzazione dei ricombinanti ha permesso l’isolamento di cloni con la ITD e di knockout funzionali che mostrano la down-regolazione trascrizionale e proteica di BCOR e l’upregolazione dei target di PRC2, a supporto della rilevanza del modello. Lo studio proseguirà con l’introduzione della ITD in iPSC per individuare i pathway alterati e il loro targeting farmacologico.I documenti in SFERA sono protetti da copyright e tutti i diritti sono riservati, salvo diversa indicazione.
